為什么有些細(xì)胞實(shí)驗(yàn)無(wú)法重復(fù)？

為什么有的細(xì)胞在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間里，都養(yǎng)不到好狀態(tài)？

為什么實(shí)驗(yàn)室中，超過(guò)一株以上的細(xì)胞都時(shí)好時(shí)壞？

細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢、細(xì)胞變形、碎片增加、懸浮細(xì)胞容易成團(tuán)、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點(diǎn)……

如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細(xì)胞株老化、細(xì)菌污染等原因，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示——你的細(xì)胞可能被支原體污染了！

圖. 電鏡下的支原體

支原體污染普遍存在

據(jù)美國(guó)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，細(xì)胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。同時(shí)，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過(guò)電鏡才能看到，不易被實(shí)驗(yàn)者肉眼發(fā)覺(jué)，支原體污染逐漸成為一個(gè)普遍存在的問(wèn)題。

支原體污染的危害

支原體污染是個(gè)循序的過(guò)程，普通抗生素對(duì)其無(wú)效。因此，支原體污染有多煩人，相信實(shí)驗(yàn)人都領(lǐng)教過(guò)了。

1、細(xì)胞狀態(tài)不佳，生長(zhǎng)速度慢，實(shí)驗(yàn)無(wú)法推進(jìn)。

2、細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，時(shí)間、經(jīng)費(fèi)的浪費(fèi)。

3、一株污染的細(xì)胞成為實(shí)驗(yàn)室的污染源，對(duì)工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染，進(jìn)而污染其他細(xì)胞，導(dǎo)致其他細(xì)胞繼發(fā)性污染，實(shí)驗(yàn)受影響，數(shù)據(jù)無(wú)法重復(fù)，預(yù)期結(jié)果出不來(lái)。

如何有效把支原體趕出細(xì)胞？

對(duì)于已耗費(fèi)很多時(shí)間、大量擴(kuò)增起來(lái)的細(xì)胞，或經(jīng)過(guò)基因轉(zhuǎn)染、體外刺激等大量工作處理過(guò)的細(xì)胞，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被支原體污染了，怎么辦？由于前期工作量巨大，我們無(wú)法丟棄已有細(xì)胞。但由于價(jià)格原因，又無(wú)法使用那些昂貴試劑殺除細(xì)胞上的支原體，同時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員還需要清除細(xì)胞上的支原體污染，讓實(shí)驗(yàn)得以往下推進(jìn)，以終獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

實(shí)驗(yàn)者可選用對(duì)支原體*的抑制劑，通過(guò)對(duì)細(xì)胞的前期處理，中期加藥，逐步通過(guò)4代左右的培養(yǎng)，從而將支原體污染*清除，確保試驗(yàn)順利推進(jìn)，結(jié)果準(zhǔn)確。*此類(lèi)試劑眾多，締一生物生物周?chē)膶?shí)驗(yàn)人做過(guò)很多嘗試，其中效果確切且性價(jià)比很高的當(dāng)屬德國(guó)Minerva公司的ZellShield®祛除劑。

Zell Shield®是一種即用型新型復(fù)合抗生素，副作用極低，能有效地祛除細(xì)胞培養(yǎng)支原體、細(xì)菌、真菌污染。Zell Shield®使用方法簡(jiǎn)單，直接加入培養(yǎng)基中保護(hù)細(xì)胞。

它的原理：通過(guò)抑制支原體增殖中某種蛋白的合成，達(dá)到抑制新的支原體增殖的目的。屬?gòu)?fù)合型的新型抗生素。它廣泛適用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的科研和工業(yè)領(lǐng)域。

特點(diǎn)

1、適用范圍廣

普通細(xì)胞培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)

2、無(wú)細(xì)胞毒性

目前，Zell Shield®對(duì)多種細(xì)胞系都無(wú)細(xì)胞毒性。

3、高效廣譜

祛除支原體效果明顯，同時(shí)對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、病原蟲(chóng)、真菌等污染亦可有效預(yù)防。

4、操作簡(jiǎn)便

可直接加入到預(yù)處理的培養(yǎng)基或細(xì)胞中進(jìn)行消毒。

5、穩(wěn)定性高

在細(xì)胞孵育期內(nèi)，Zell Shield®始終保持穩(wěn)定的活性。

6、低耐藥風(fēng)險(xiǎn)

精心挑選的新型復(fù)合抗生素只有極低的耐藥風(fēng)險(xiǎn)，多種抗生素聯(lián)合使用幾乎不會(huì)產(chǎn)生耐藥突變株。

操作步驟：

第1步：研究發(fā)現(xiàn)，98%的支原體污染發(fā)生在細(xì)胞間隙。因此，首先要把細(xì)胞消化下來(lái)，放入離心管，懸浮沖洗，離心，棄上清，反復(fù)三次。此時(shí)可將細(xì)胞上大部分的支原體去除，為進(jìn)一步加藥抑制做好準(zhǔn)備。

第二步：培養(yǎng)液中加入1%的ZellShield®，細(xì)胞進(jìn)行正常培養(yǎng)。新的支原體增殖受到抑制，舊的支原體隨著細(xì)胞的換液逐步減少，通過(guò)4代左右的培養(yǎng)，細(xì)胞中的支原體基本可被*清除。

注：使用ZellShield®時(shí)，不需使用鏈青霉素。

此試劑價(jià)格約2200元/50ml，可保證大量細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)得以順利推進(jìn)。

總之，細(xì)胞培養(yǎng)中，支原體污染發(fā)生頻繁。有時(shí)帶來(lái)的危害會(huì)造成實(shí)驗(yàn)的巨大損失。應(yīng)經(jīng)常檢測(cè)和及時(shí)排除支原體污染，讓細(xì)胞在健康安全的環(huán)境下生長(zhǎng)，為獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，打下良好的基礎(chǔ)。